ELISA-kits Testvereisten

Zorg voor een goed contrast in de formele test, de testomstandigheden van positieve en negatieve controle moeten worden genomen en de te testen monsters moeten in twee exemplaren worden gemaakt om de nauwkeurigheid van de testresultaten te garanderen.

Soms is de achtergrond hoger, wat wijst op een niet-specifieke reactie, die kan worden afgesloten met schapenserum, konijnenserum of BSA.

Selectie van experimentele omstandigheden

Bij ELISA is het belangrijk om verschillende experimentele omstandigheden te selecteren, waaronder: (1) Keuze van vaste-fasedragers: veel stoffen kunnen worden gebruikt als vaste-fasedragers, zoals PVC, polystyreen, polyacrylamide en cellulose. Het kan de vorm aannemen van een concave plaat, reageerbuis, kraal, enz. Momenteel wordt het gewoonlijk gebruikt om concave polystyreenplaten met 40 putjes te hebben.

Ongeacht wat voor soort drager, vóór gebruik kan worden gescreend: met dezelfde hoeveelheid antigeenpakket moet, onder dezelfde experimentele omstandigheden, worden gereageerd om te observeren of de kleurweergavereactie homogeen is, volgens welke het goede adsorptieprestaties heeft. (2) Pakket op basis van selectie van antilichamen (of antigeen): antilichaam (of antigeen) geadsorbeerd op het oppervlak van de vaste -fasedrager, de vereiste ernst is beter, adsorptie vereist over het algemeen een PH tussen 9,0 en 9,6. De adsorptietemperatuur, -tijd en eiwithoeveelheid hebben ook een zekere impact, meestal meer dan 4 graden C gedurende 18 tot 24 uur. De optimale concentratie van eiwitpakketten moet worden getitreerd: nadat ze zijn verpakt met verschillende eiwitconcentraties (0,1, 1,0 en 10 µg/ml, enz.), worden de OD-waarden van de positieve monsters waargenomen wanneer andere testomstandigheden hetzelfde zijn. Selecteer de concentratie met de grootste OD-waarde en de laagste eiwithoeveelheid.

Voor de meeste eiwitten is dit gewoonlijk 1 tot 10 µg/ml. (3) Selectie van de werkconcentratie van met enzym-gelabelde antilichamen: ten eerste het initiële effect van titratie met behulp van de directe ELISA-methode (zie het gedeelte met enzym-gelabelde antilichamen).

Stel vervolgens andere omstandigheden in of gebruik de 'square array-methode' (gespannen, referentie voor het te onderzoeken monster, en enzym-gelabelde antilichamen zijn verschillende verdunningen) in het formele experimentele systeem, waarbij de werkconcentratie nauwkeurig wordt getitreerd. (4) De keuze van de base van het enzym en de waterstofdonor: de keuze van de waterstofdonor is goedkoop, veilig, met een duidelijke kleur-weergavereactie, en is zelf kleurloos. Sommige waterstofdonoren (bijv. OPD, enz.) hebben potentiële kankerverwekkende effecten; er moet voor worden gezorgd dat ze worden beschermd. Voorwaardelijke mensen zouden niet-carcinogene, hooggevoelige waterstofdonoren moeten gebruiken, zoals TMB en ABTS, momenteel bevredigender waterstofdonoren. Na een periode van inwerking moeten sterke zuren of alkaliën worden toegevoegd om de reactie te stoppen. Meestal is een substraatinwerkingstijd van 10-30 minuten geschikt. De substraatgebruiksvloeistof moet vers worden bereid, vooral als vóór gebruik H2O2 wordt toegevoegd.